详细介绍：

德运康瑞自主开发SEERNA® ISH RNA荧光原位检测试剂盒，可以针对不同mRNA/lncRNA等靶标RNA分子定制探针，进行表达水平和空间位置验证。该产品一次可以同时验证1~4个靶标，提供了一种亚细胞分辨率、高灵敏度、高特异性的科研验证工具。

技术原理

SEERNA®ISH RNA荧光原位检测试剂盒是基于信号放大的单分子 RNA 荧光原位杂交技术，通过配对设计的 DNA 连接探针（DLPs）与靶标 RNA 分子互补配对结合，然后使用具有以RNA为模板进行DNA连接能力的连接酶，进行 DLPs 的第一步连接成半环；之后以互补的 DNA 为模板，在 Splint连接酶的作用下实现 DLPs 的成环；随后在 DNA 聚合酶的作用下，进行滚环扩增反应实现信号放大；最后在滚环扩增产物上，杂交带有单个荧光基团标记的检测探针，进行荧光显微拍照成像。

试剂盒组成

Buffer Reagent Kit (A)：样本前处理以及反应buffer试剂盒，2-8 °C储存

Reaction Reagent Kit (B)：反应体系和各位酶组分等，-20 °C储存

Probe Kit (C)： 靶标探针，阴、阳探针和荧光检测探针试剂盒，-20 °C储存

Target Retrieval Kit (D)：靶标修复液，常温储存

检测说明

适用样本：新鲜冰冻OCT包埋组织切片；福尔马林固定石蜡包埋样本，先固定后OCT包埋，细胞爬片

检测通量：1-4个RNA 靶标，可提供靶标探针个性化探针

阴阳对照：试剂盒默认自带1个阳性探针UBC，1个阴性探针dapB

显微镜荧光通道：DAPI通道，Alexa Fluor 488，Cy3，Texas Red（Cy3.5），Cy5，Alexa Fluor 750

实验流程

（1）样本前处理

冰冻样本：切片退冻、固定、脱水和透化等，以便探针和反应所需的酶等成分进入；

FFPE样本：烤片、脱蜡、复水、固定、复性、透化和脱水等。

（2）探针杂交与滚环扩增：探针与RNA杂交之后连接成环，通过滚环扩增放大信号；

（3）荧光成像：检测探针携带特定荧光基团，与靶标基因杂交探针特异性结合，在显微镜下选择合适的荧光滤块和曝光时间进行扫描成像，通过识别荧光信号确定该位置靶向结合的基因；

（4）图像分析：在组织图像中标记每个靶基因，可以进行信号点计数分析。

视频教程

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订购信息

探针信息确认后，需大概7个工作日进行探针设计和定制；整个的试剂盒定制需2-3周。

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