Well-Paired-Seq单细胞测序平台
详细介绍:
Well-Paired-Seq单细胞测序平台是基于德运康瑞自主研发的双孔嵌套式微流控芯片,协同局部准静态流体力学和尺寸排阻原理,实现高效率的细胞/编码微球捕获和配对,可有效去除细胞团、游离RNA等非单细胞杂质,实现高效降噪,获得高细胞利用、高灵敏基因检出和高保真分子分析。
技术原理
双孔嵌套式微流控芯片利用局部准静态流体力学和尺寸排阻原理,巧妙设计大小孔嵌套方式形成微孔腔室,可实现超60%的细胞捕获效率;通过芯片流体冲洗,可去除多余的细胞、细胞碎片、细胞团、游离RNA等背景干扰,是首款集成“降噪”功能的单细胞处理芯片。
实验流程
首先依次捕获细胞和编码微球,实现1:1配对;再通入油性介质及细胞裂解液,进行液封和细胞裂解;释放的mRNA被编码微球捕获,回收;最后逆转录,cDNA扩增及测序文库构建。
测试数据展示
(1)背景清洗能力测试
对捕获细胞进行Calcein AM荧光染色,清洗前后进行显微镜观察,结果显示清洗可有效去除多余细胞及团块,细胞捕获率达到60%以上。清洗后捕获细胞与背景噪音之间明显区分,表明在芯片内清洗可有效降低背景噪音干扰。
(2)单细胞转录组多种样本测试
目前Well-Paired-Seq单细胞测序平台已成功测试上百种样本类型,在血液或多种实体组织中均有优异领先的基因检出性能,多种样本类型细胞的基因中位值可达到2000+,同时温和的捕获方法对于脆弱细胞类型如中性粒细胞的捕获也有明显的优势。
(3)单细胞核转录组小鼠脑测试
Well-Paired-Seq平台兼容单细胞核转录组检测,可以为脑、心脏、肾脏等复杂组织或珍稀冻存样品提供单细胞水平研究平台,大大减少了样本处理的难度。选择小鼠脑进行测试,捕获细胞数10000左右,细胞检出基因中位值达到可达1000+, 表明Well-Paired-Seq平台基因检出灵敏度性能表现优异。
技术优势
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